Recuento de leucocitos

 Recuento de leucocitos

 

Fundamento:

El recuento de leucocitos consiste en la determinación del número de leucocitos presentes en un volumen determinado de sangre ( generalmente en 1mm₃).

Este es un recuento manual, por lo que conviene hacer primero la visualización de una cámara de recuento en vacio.

Material: 

• Micropipeta de 10 μl a 100 μl. 
• Puntas de micropipeta.
• Tubo de ensayo.
• Cubreobjetos.
• Microscopio.
•  Cámara de neubauer.
• Pipeta de thoma
• Papel de filtro.

Reactivos: 

• Solución de Turck 
• Sangre anticoagulada con EDTA.

Procedimiento: 

1. Situar el cubreobjetos sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión se humedece con agua la zona central  de la cámara, y se ejerce una ligera presión al mismo tiempo que se desliza el cubreobjetos sobre las bandas laterales.
2. El procedimiento se puede realizar de 2 formas con micropipeta y con pipeta de thoma, primero se va a explicar el procedimiento para realizarlo con micropipeta:
1.  Pipetear 100 μl de sangre y mezclar en el tubo de ensayo con 1900 μl de líquido de Turck para obtener una dilución 1/20 o con 900 μl para obtener una dilución 1/10.
2. Una vez preparada la dilución, cogemos una gota y la depositamos entre la cámara y el cubreobjetos. Para ello vamos a colocar la punta de la micropipeta con 50 μl en posición vertical sobre uno de los bordes que no ha quedado adherido del cubre y dejamos que el líquido entre por capilaridad en el espacio entre la cámara y el cubre. Tendremos que fijarnos en que no se formen burbujas y que rebose la sangre por los bordes del cubreobjetos

1.  Pasamos al procedimiento con la pipeta de thoma que se realiza de la siguiente forma:
1. Colocar a la pipeta de thoma un tubo de goma con boquilla.
   
2. Con la pipeta de thoma aspiramos la sangre hasta la señal de 0,5.
3. Limpiar el exterior de la pipeta de thoma con un algodón  y sin hacer bajar el nivel de sangre que hay en el interior de la pipeta de thoma.
4. Aspirar el líquido hasta la señal de 11.
5. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta de thoma y homogeneizar el contenido de la pipeta. Para ello se sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e índice, y se agita en sentido horizontal durante 2 o 3 minutos.
6. Desechar las 3 primeras gotas emitidas por la pipeta. Estas corresponden al líquido presente en el tubo capilar largo de la pipeta de thoma, que no esta mezclado con la sangre.

1.  Para introducir las gotas en la cámara de neubauer, ambos procedimientos tienen los mismos pasos:
1. Se coloca la pipeta en posición casi vertical, se deja salir algo de líquido y se retira justo antes de que se llene completamente el espacio entre el cubreobjetos y la cámara.
2. Dejar reposar la sangre diluida contenida en la cámara durante unos minutos, para que las células presentes en ella puedan sedimentarse.
3. Enfocar con el microscopio a 40x y con el condensador a baja altura y verificar que la distribución de los leucocitos es homogénea.
4. Contar los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes de las esquinas del retículo.

Lectura de resultados

 

Se cuentan los leucocitos presentes en 4 cuadrados grandes, hay que dividir por 4 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número de leucocitos que hay en un cuadrado grande.

Como la longitud de cada uno de los lados de los cuadrados grandes es de 1mm y la longitud del espacio comprendido entre estos y el cubreobjetos es de 0,1mm, hay que multiplicar por 10 el resultado anterior.

Como la sangre antes del recuento se diluye, hay que multiplicar el resultado anterior por 10, si se ha partido de la sangre diluida a 1/10, o por 20, si se ha partido de la sangre entera diluida a 1/20.

La fórmula es la siguiente:

WBC= L/4x10xD

Nuestros resultados obtenidos son los siguientes:

WBC=187/4x10x10=4675leucocitos.

 

Interpretación de los resultados

 

Se considera normal un WBC comprendido entre 5000 y 11000 mm₃. Su disminución se produce en leucopenias y su aumento se da en leucocitosis. En nuestro caso tenemos un número de leucocitos algo reducido, por lo que tendríamos una pequeña leucopenia.

 

Observaciones: 

• Pipetear los volúmenes adecuados de cada uno de los reactivos utilizados.
• Utilizar sangre anticoagulada. 
• Fijarnos que no se formen burbujas y que rebose la sangre diluida por fuera de los bordes del cubreobjetos.
• Humedecer el cubreobjetos, antes de colocarlo en la cámara de neubauer, para que se adapte bien a los bordes de la cámara.
• Colocar la pipeta en posición casi vertical, dejar salir algo de líquido y retirarlo justo antes de que llene completamente el espacio entre el cubre y la cámara.
• Homogeneizar la sangre antes de mezclarlo con la solución de Turck.

Normas de prevención: 

• Utilizar los EPIS correspondientes, para realizar la práctica.
• Depositar los residuos generados durante la realización de la práctica, en los contenedores adecuados.
• Limpiar, desinfectar y esterilizar los materiales utilizados cuando terminos de realizar la práctica.
• Tener precaución al trabajar con la sangre, para que no nos salpique y pueda entrar en contacto con alguna herida.
  

Actividades

1º ¿Cuál es el líquido de dilución utilizado en el WBC?

La solución de Turck.

2º ¿Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución?

Tiñe el núcleo de los leucocitos para que estos puedan ser obserbados mejor.

3º ¿Con qué objetivo se pueden contar los leucocitos?

Para saber si el paciente sufre de leucopenia o leucocitosis

4º Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos, ¿cuál es el WBC obtenido?

100/2x10x10=5000 leucocitos.