Tinción de Giemsa
Tinción de Giemsa
Fundamento: Utilizamos como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.
Material:
- Microscopio óptico.
- Portaobjetos.
- Cristalizador.
- Puentes de tinción.
- Pipetas pasteur.
- Frascos lavadores.
- Tubos de ensayo.
Reactivos:
- Colorante Giemsa.
- Solución tampón pH 7,2 de Panreac.
- Metanol.
- Aceite de inmersión.
Técnica:
- Realizamos un frotis sanguíneo, para ello cargamos un capilar con la sangre de la muestra y la depositamos en el portaobjetos.
- Cogemos otro porta, y lo colocamos con un extremo un poco por delante de la gota de sangre formando un ángulo de 45º con el porta donde esta la muestra.
- Desplazamos el porta hasta que alcance la gota de sangre.
- Dejamos que la gota se extienda, a lo largo del portaobjetos extensor.
- Antes de que la sangre alcance los bordes del porta extensor, deslizamos el porta hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media.
- Colocamos el frotis sobre el puente de tinción en el cristalizador en posición horizontal.
- Cubrimos con metanol durante 3 minutos. Escurrimos y dejamos secar al aire.
- Diluimos en un tubo de ensayo 0,2 ml de azur-eosina-azul de metileno según giemsa, con 2 ml de solución tampón pH 7,2. Homogeneizamos el tubo con una pipeta pasteur y cubrimos el frotis, y lo dejamos reposar 25 minutos.
- Escurrimos y lavamos con agua. Cuando se seque lavamos con una solución tampón a pH 7,2 hasta eliminar el colorante. Dejamos escurrir y secamos dejando el portaobjetos en posición vertical.
- Observamos a través del microscopio con el objetivo de 40x.
Interpretación clínica de los resultados:
Una vez que esté seca la tinción, vertemos una gota de aceite de inmersión y lo observamos con el microscopio con el objetivo a 100x.
Los eritrocitos se tiñén de color rosa y las plaquetas de color violeta rojizo.
Los eosinófilos se observan con el núcleo azul violeta, el citoplasma azul y los gránulos de color rojo anaranjado.
Los basófilos presentan un núcleo de color púrpura y granulación de color azul oscuro.
Los monocitos y linfocitos se observan con un núcleo de color violeta y el citoplasma azul, un poco más claro en el monocito.
Ejercicios:
1º) ¿ Cuáles son los anticoagulantes más adecuados para esta técnica?
La heparina o el EDTA, ya que el citrato sódico y el oxalato potásico pueden dar preparaciones defectuosas.
2º) ¿ Con qué reactivo fijamos el frotis?
Metanol.
3º) ¿ Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis?
25 minutos
