Recuento de hematíes

 Recuento de hematíes

 

Fundamento: Para el recuento en cámara de glóbulos rojos, se diluye la sangre en un líquido y posteriormente se deposita en la cámara de recuentom donde se cuentan las células presentes en algunos cuadrados de uno de los reticulocitos.

Material: 

• Pipeta de Thoma, para recuento de glóbulos rojos.
• Un tubo de goma, adaptable a la pipeta de Thoma.
• Un cubreobjetos.
• Un microscopio.

Reactivos:

• Reactivo de Hayem. 
• Sangre capilar o venosa anticoagulada con EDTA.

Procedimiento:

1. Colocamos el cubreobjetos sobre el retículo de la cámara. Para facilitar su adhesión, se produce una ligera presión al mismo tiempo que se desliza el cubreobjetos sobre las bandas laterales, previamente humedecidos con h2O en su fragmento central.
2. Aspirar la sangre hasta la señal de 0,5. Si sobrepasa algo el enrase se hace descender la columna de sangre tocando la punta de la pipeta con un algodón.
3. Limpiar el exterior de la pipeta con un algodón y sin hacer bajar el nivel de sangre.
4. Aspirar líquido hasta la señal de 101.
5. Desenganchar el tubo de goma de la pipeta de thoma y homogeneizar el contenido de la pipeta de thoma. Se sujeta la pipeta por sus extremos, con los dedos pulgar e índice, y se agita en sentido horizontal durante 2 o 3 minutos.
6. Desechar las 3 primeras gotas de la pipeta. Estás corresponden al líquido en el tubo capilar de la pipeta de Thoma, que no está mezclada con la sangre.
7. Depositar la siguiente gota entre la cámara y el cubre. Se coloca la pipeta en posición casi vertical, se sitúa la punta de la pipeta en el borde adecuado, se disminuye algo la presión del dedo índice sobre el extremo de la pipeta y se retira está justo antes de que se llene completamente el espacio entre el cubre y la cámara. Durante esta operación hay que evitar que se formen burbujas.
8. Dejar reposar la sangre diluida, que hay en la cámara, durante unos minutos, para que las células puedan sedimentarse.
9. Utilizar el microscopio con el objetivo de 40x, y verificar que la distribución de los hematíes es homogénea.
10. Contar los hematíes que hay en las 4 cuadros medianos de las esquinas y en el centro.

 

Lectura: 

Como se cuentan los hematíes presentes en 5 cuadrados medianos, hay que multiplicar por 5 la cifra obtenida en el recuento, para calcular el número de hematíes que hay en un cuadro grande. Como la longitud de cada uno de los lados del cuadrado grande central es de 1mm, y la longitud del espacio comprendido entre el cuadrado grande central es de 0,1 hay que multiplicar por 10 el resultado anterior, para determinar el número de hematíes en 1mm₃.

Como la sangre, se diluye, hay que multiplicar el resultado por 200, si se ha utilizado la sangre entera contenida en el enrase de 0,5.

Para el cálculo debe emplearse la siguiente fórmula:

RBC= H x 5 x 10 x D

RBC = recuento de hematíes (número de hematíes por mm₃ de sangre).

H= Hematíes contados en 5 cuadrados medianos.

D = Factor de dilución ( 100 o 200)

Interpretación de resultados:

La disminución de RBC se produce en anemias y su aumento se da en las policitemias.

Se considera normal un RBC comprendida entre los 4 y los 5,5 millones/mm₃ en las mujeres, y entre los 4,5 y los 6 millones/mm₃ en los varones.

 

Observaciones: 

Esta práctica también se puede realizar sustituyendo la pipeta de thoma por la micropipeta.

Ejercicios: 

1º) ¿ Qué se debe hacer si el líquido de Hayem contiene precipitados? 

Antes de usarlo hay que filtrarlo.

2º) ¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados pequeños donde se han contado los hematíes?

0,05 x 0,05 x0,1 = 2,5 x 10‾⁴

3º) ¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados medianos donde se han contado los hematíes?

0,2 x 0,2 x 0,1 = 0,04 mm³

4º) ¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre el cuadrado central?

1 x 1 x 0,1 = 0,1 mm³

5º) Si la pipeta de Thoma  se enrasa con sangre hasta la señal 1 ¿ Cuál es la dilución posteriormente obtenida?

La dilución es de 1/100.

6º)  Si la sangre se diluye a 1/200 y se cuentan 450 hematíes en 5 cuadros medianos ¿ Cuál es la RBC obtenida?

450 x 5 x 10 x 200 = 4,5 x 10⁶