Determinación cuantitativa del tiempo de tromboplastina parcial activada

 Determinación cuantitativa del tiempo de tromboplastina parcial activada

 

Fundamento: Los factores intrínsecos de la coagulación, se activan en presencia de un complejo fosfolipídico y un activador soluble en plasma citrado, se mide el tiempo transcurrido después de la adición de cloruro calcico, hasta la formación de coágulo de fibrina.

Material: 

•  Coagulómetro.
•  Micropipeta de 10цl y 1000цl.
•  Puntas de micropipeta.
• Gradilla.
• Tubo de ensayo. 
• Piseta.
• Cubetas de coagulómetro.

Reactivo: 

• R1: ácido alégico. 
• R2: Cloruro cálcico.
• Plasma citrado.

Procedimiento:

Esta prueba se realiza en el coagulómetro, que nos permite detectar la formación de un coágulo, y del tiempo que tarda en hacerlo. 

1. Para realizar esta prueba lo primero que haremos será encender el coagulómetro, mediante el botón de la parte de atrás del coagulómetro, y esperaremos a que aparezca un asterisco, que indica que se ha alcanzado la temperatura óptima de 37º. Los botones con los símbolos de flecha nos permitirán elegir el programa, en este caso sera APPT.
2. Para esta prueba los reactivos que vamos a utilizar ya están preparados para su uso, solo hay que incubarlos a temperatura ambiente.  
3. Preparamos una micropipeta con 100 цl de plasma, y vertimos su contenido en una cubeta de coagulómetro.
4. Tomamos 100 цl de R1 de APPT, con la micropipeta y los mezclamos en la misma cubeta, junto a los 100 цl, mezclando y agitando el contenido con la micropipeta, sin hacer burbujas.
5. Introducimos la cubeta de coagulación, en la gradilla del coagulómetro a 37º C, ponemos la mosca y contamos 5 minutos.
6. Cuando pasen estos 5 minutos cogeoms 100 цl de reactivo R2, lo vertemos en una cubeta de coagulación y lo colocamos unos minutos en la gradilla del coagulómetro.
7.  Colocamos la cubeta con el plasma, el R1 y la mosca en el orificio de medición del coagulómetro, y lo cubrimos con el tapón negro agujereado.
8. Cogemos con la micropipeta 100 цl de reactivo R2 y lo preparamos metiendo la punta por el agujero del tapón.
9. Pulsamos el botón RESET, y cuando aparezca en el monitor 00:00, vertemos los 100 цl de R2, para que se produzca la reacción de coagulación.
10. Dejamos que pase el tiempo, y cuando pare el temporizador, se producirá la formación del coágulo, que en nuestro caso ha sido de 73,31 segundos.
11.  Una vez anotado el tiempo, sacamos la cubeta , desinfectamos el contenido con alcohol, lavamos la cubeta y la mosca con jabón.

 

 Interferencias:

No usar como anticoagulante oxalato sódico con EDTA o heparina. Anticonceptivos orales, estrógenos o embarazo pueden influir en los resultados. Se han descrito varias drogas y otras sustancias en su determinación.

Resultados:

Ratio: 73,31/28,71= 2,56 segundos

 Observaciones:

• Seleccionar mediante las teclas de dirección el programa APPT, que es la determinación que vamos a realizar en esta práctica. 
• Atemperar en las gradillas del coagulometro, las diferentes soluciones antes de realizar la medición.
• Utilizar una punta de micropipeta diferente para verter cada reactivo.
• No añadir el reactivo R2, hasta que en la pantalla del coagulómetro aparezca 00:00.  
• Atemperar la mezcla de plasma y R1, y el reactivo R2, durante 5 minutos.
• Añadir al plasma citrado, el reactivo R1, para poder llevar a cabo la coagulación. 
• Apuntar los segundos que ha tardado en producirse la coagulación para realizar el ratio de coagulación.
  
• No olvidar colocar la mosca para realizar la coagulación.
• Fijarnos en la concentración del patrón que aparece en las instrucciones y botes de reactivos.
  

Normas de prevención: 

• Utilizar los EPIS correspondientes, para realizar la práctica.
• Depositar los residuos generados durante la realización de la práctica, en los contenedores adecuados.
• Limpiar, desinfectar y esterilizar los materiales utilizados y lavamos las cubetas y la mosca con jabón, cuando terminos de realizar la práctica.