Determinación del tiempo de protrombina (PT)

 Determinación del tiempo de protrombina (PT)

Fundamento: Basado en el test de A. Quick, el ensayo mide el tiempo transcurrido, hasta la formación del coágulo después de la mezcla del plasma con tromboplastina ( un extracto de tejido rico en factor tisular, fosfolípidos y calcio). La coagulación se inicia por activación del FVII con el factor tisular.

Material: 

•  Coagulómetro.
•  Micropipeta de 10цl y 1000цl.
•  Puntas de micropipeta.
• Gradilla.
• Tubo de ensayo. 
• Piseta.
• Cubetas de coagulómetro. 
• Pipeta graduada.
  

Reactivos: 

•  PT: Tromboplastina de cerebro de conejo, cloruro cálcico, inhibidor de heparina, tampón y conservantes.
• Plasma citrado.

Procedimiento:

Esta prueba se realiza en el coagulómetro, que nos permite detectar la formación de un coágulo, y del tiempo que tarda en hacerlo. 

1. Para realizar esta prueba lo primero que haremos será encender el coagulómetro, mediante el botón de la parte de atrás del coagulómetro, y esperaremos a que aparezca un asterisco, que indica que se ha alcanzado la temperatura óptima de 37º. Los botones con los símbolos de flecha nos permitirán elegir el programa, en este caso sera TP.  
2. Reconstruimos el vial de tromboplastina (TP), solidificando con 2 ml de agua destilada (o lo que nos indique el bote) con una pipeta graduada.
3.  Vertemos 100 цl de plasma en una cubeta de coagulometro y la colocamos en una gradilla del coagulómetro, para que se atempere a 37ºC, durante 5 minutos.
4. En otra cubeta de coagulómetro, colocamos 200 цl de protrombina y lo dejamos que se atempere a 37ºC, durante 5 minutos.
5. En el orificio de medición del coagulómetro, colocamos la cubeta de 100 цl de plasma, introducimos la mosca metalizada que ayuda a la mezcla de reactivos y a la coagulación, y lo tapamos con el tapón negro con agujero.
6. Preparamos una micropipeta con 200 цl de reactivo PT, y introducimos la punta de la micropipeta por el orificio del tapón negro.
7. Pulsamos el botón RESET del coagulómetro y esperamos que el temporizador de la pantalla del coagulómetro, llegue a 00:00 y pulsamos el botón de la micropipeta, para verter los 200 цl de PT.
8. Dejamos que pase el tiempo, y cuando pare el temporizador, se producirá la formación del coágulo, que en nuestro caso ha sido de 23,2 segundos.
9. Una vez anotado el tiempo, sacamos la cubeta , desinfectamos el contenido con alcohol, lavamos la cubeta y la mosca con jabón.

  

Resultado: 

INR= (PT muestra/PT control) ^ISI

INR = (23,2/12,3) ₁‚₂₂ = 2,168

Interferencias: 

El reactivo PT contiene un inhibidor específico de la heparina. Concentraciones de heparina ≤1Ul/ml no influyen en la determinación del PT.

Descartar muestras hemolíticas o coagulasas. Con coagulometro BIOBAS 1000, triglicéridos, no interfiere hasta 500 mg/dl, la hemoglobina no interfiere hasta 100 mg/dl, y bilirrubina no interfiere hasta 15 mg/dl.

Algunos medicamentos comunes pueden afectar al resultado de PT.

Observaciones: 

• Seleccionar mediante las teclas de dirección el programa APPT, que es la determinación que vamos a realizar en esta práctica. 
• Atemperar en las gradillas del coagulometro, el plasma citrado y el reactivo PT, para realizar la determinación.
• Utilizar una punta de micropipeta diferente para verter cada reactivo.
• Fijarnos en la cantidad que nos aparezca en el bote de PT, para añadir la cantidad adecuada de agua, para que se disuelva su contenido.
• Tomar 200 цl de reactivo PT, para verterlo sobre el orificio del tapón negro, en el momento en que aparezca en la pantalla del coagulómetro 00:00.
• Apuntar los segundos obtenidos en la coagulación, para realizar el INR de la protombina.
• No olvidar colocar la mosca para realizar la coagulación.
• Fijarnos en la concentración del patrón y el ISI que aparece en las instrucciones y botes de reactivos. 

Normas de prevención: 

• Utilizar los EPIS correspondientes, para realizar la práctica.
• Depositar los residuos generados durante la realización de la práctica, en los contenedores adecuados.
• Limpiar, desinfectar y esterilizar los materiales utilizados y lavamos las cubetas y la mosca con jabón, cuando terminos de realizar la práctica.